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可是佟玲就皱着眉头问：“李成，蒋茜为什么得罪她们了？”“谁知道呢？蒋茜就是妒忌她们吧？不就是小鸡肠嘛？”“我看刘娟不是简单的女孩子？”“我说佟玲，你怎么会这样说呢？”“刘娟还有心计的？李成，你没有告诉刘娟说你是长沙的？”“没有，看唐露说了没有？”“我猜唐露是应该没有说，我们跟刘娟就是在食堂一面之交，今天下午打蓝球的时候，刘娟送红牛饮料，都是张慧安排的？所以说刘娟的心计还没有实验呢？”“我说佟玲，你把刘娟说得跟女特务似的？”“我是告诉你，让你有心理准备，不然，等到哪天，你会怪我没有给你当好参谋！”“佟玲，你现在是越来越像神探了？”“如果你不信，晚上吃蛋糕的时候，你问刘娟好了？刘娟是辣得狠？是街上女孩子呢？”“唐露，吴红花不是街上的呢？”“家庭背景不一样？你看高干子弟，跟平民百姓的孩子一样吗？就说你嘛！在长沙你是横行霸道的？在祁阳，你就不敢放肆了？毕竟这生存环境就不适应你的个性，你现在只是收心养性的磨练？也算是成才之道。”“我说佟玲，你现在倒像是老道了？到了人生最高境界了呢？”“这说明你有内含和功力！”话音刚落，走廊里将响起上课铃声，于是佟玲就带着李成跟着同学们往教室走进去。

这节课是生物课，老师陈跃进拿着教案，慢腾腾地走进324班教室，走到讲台前，一边放教案一边说：“同学们好！”“老师好！”“今天，我给同学们讲微生物的实验室培养：19世纪中期。关系到法国经济命脉的酿造业曾一度遭受毁灭性的打击。在生产过程中，出现了葡萄酒变酸，变味的怪事。经过一番研究。法国科学家巴斯德发现，导致生产失败的根源在于发酵物中混入了杂菌。由此人们认识到保持培养物纯净的重要性。

防止杂菌入侵，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前提。在实验室培养微生物，一方面需要为培养的微生物提供合适的营养和环境条件。另一方面需要确保无处不在的其他微生物无法混入。在本课题中，我们将通过培养大肠杆菌（ESCHERICHIACOLI）的实验，学习微生物培养的基本技术。

一是培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质——培养基（CULTUREMMEDIA）。其中，配制成的液体状态的基质称为液体培养基，配制成的固体状态的基质称为固体培养基。在液体培养基中加入凝固剂琼脂后，制成琼脂固体培养基，它是实验中最常用的培养基之一。微生物在固体培养基表面上生长，可以形成肉眼可见的菌落（图2~1）。

虽然各种培养基的具体配方不同。但一般都含有水，碳源（提供碳元素的物质）氮源（提供氮元素的物质）和无机盐。回忆有关活细胞中元素组成的知识，想一想为什么大多数培养基都含有这四类物质。下面让我们一起来看一看某种细菌培养基的营养构成。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对PH，特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时需将培养基的PH调至酸性，培养细菌时需将PH调至中生性或微碱性，培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。

无菌技术：获得纯净培养物的关健是防止外来杂菌的入侵。无菌技术围绕着如何避免杂菌的污染展开，主要包括以下几个方面。

一对实验操作的空间，操作者的衣服和手，进行清洁和消毒（DISINFECTION）二将用于微生物培养的器皿，接种用具和培养基等进行灭菌（STERILIZATION）。

三为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。四实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。消毒是指使用较为温和的物理和化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）。灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。下面，我们重点学习消毒和灭菌的方法。

实验室常用的消毒和灭菌方法：消毒方法，日常生活中经常用到煮沸消毒法，在100度煮沸5~6MIN可以杀死微生物细胞和一部分芽孢。对于一些不耐高温的液体，如牛奶，则使用巴氏消毒法，在70~75度煮30MIN或在80度煮15MIN，可以杀死牛奶中的微生物，并且使牛奶的营养成分不被破坏。此外，人们也常使用化学药剂进行消毒，如用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源等。

灼烧灭菌，将微生物的接种工具，如接种环，接种针，或其他金属用具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌（图2~2），此外，在接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰灼烧来灭菌。

干热灭菌，将灭菌物品放入热灭菌箱（图2~3）内，在160~170度加热1~2H可以达到灭菌的目的，能耐高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管，培养皿）和金属用具等，可以采用这种方法灭菌。干热灭菌的具体操作步骤参见附录4。

高压蒸汽灭菌，将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅（图2~4）内。把锅密闭，继续加热使锅内的气压逐步上升，温度也随之升到100度以上，为达到良好的灭菌效果，一般在压力为100KPA，温度为121度的条件下，维持15~30MIN。高压蒸汽灭菌的具体操作步骤参附录4。

除了以上方法外，实验室里还用紫外线或化学药物进行灭菌消毒。例如，接种室，接种箱，或超净工作台在使用前，可以用紫外线照射30MIN，以杀死物体表面或空气中的微生物。在照射前，适量喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以加强消毒效果。实验室中常用的其他化学消毒剂，参见附录5。

实验操作，本实验用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌的纯化培养，可分成制备培养基和纯化大肠杆菌两个阶段进行。一制备牛肉膏蛋白胨固体培养基配方的比例，计算配制100ML的培养基时，各种成分的用量。

称量，准确地称取各种成分，牛肉膏比较黏稠，可以用玻璃棒挑取，放在称量纸上称量。牛肉膏和蛋白胨都容易吸稠，称取时动作要迅速，称后要及时盖上瓶盖。

容化，将称好的牛肉膏连同称量低一同放入烧杯，加入少量的水，加热。妆牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒取出称量纸，往烧杯中加入称量好的蛋白胨和氯化钠，用玻棒搅拌，使其溶解。加入琼脂，加热使其熔化。在此过程中，不断用玻棒搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。当琼脂完全熔化后，补加蒸馏水至100ML。

灭菌，将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛纸，并用皮筋勒紧，再放入高压灭菌锅，在压力为100KPA，温度为121度条件下，灭菌15~30MIN，将培养基皿用几层旧报纸包紧，5~8套培养皿作一包，包好后放入干热灭菌箱内，在160~170度左右下灭菌2H。

倒平板，待培养基冷却至50度左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。倒平板的具体操作描述如下。今天，就讲到这里，下课。”于是陈跃进就拿起教案，往教室门外走出去。

可是同学们听到下课，一时间，都露出开心的微笑，一边收拾课本一边往教室门外走出去方便。于是，走廊里，洗手间，将是男生跟女生的身影，是来也匆匆去也冲冲。

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